Mikrobiologiczne metody wody, gleby, powietrza

Mikroorganizmy są najmniejszymi, głównie pojedynczo komórkami, powszechnie występującymi w naturze. Znajduje się we wszystkich środowiskach (powietrze, gleba, woda), w ciele ludzkim i zwierzętach, w roślinach.

Odmiana jakościowa i liczba mikroorganizmów zależą przede wszystkim od związków odżywczych. Jednakże ważność ma również wilgotność, reżim temperaturowy, napowietrzanie, działanie promieni słonecznych i inne czynniki.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. Metody badania sanitarno-mikrobiologicznego naturalnych mediów umożliwiają identyfikację obecności drobnoustrojów chorobotwórczych, określają ich liczbę oraz, zgodnie z uzyskanymi wynikami, opracowują środki mające na celu wyeliminowanie lub zapobieganie chorobom zakaźnym. Ponadto konieczne jest przeprowadzenie rachunkowości ilościowej w celu modelowania ekosystemów i opracowywania zasad zarządzania naturalnymi procesami. . Zastanówmy się dalej, jakie są metody badań mikrobiologicznych .

Gleba

Uważa się, że naukowcy są jednym z możliwych sposobów przekazywania patologii zakaźnych. Wraz z wydalaniem chorych ludzi lub zwierząt, patogenne drobnoustroje penetrują glebę. Niektóre z nich, w szczególności, zarodniki, mogą przetrwać w ziemi przez długi czas (czasami kilkadziesiąt lat). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). Metody badania sanitarno-mikrobiologicznego gleby pozwalają na określenie "liczby bakterii" (liczby mikroorganizmów w glebie), jak również indeksu coli (liczby E. coli), a także liczby gatunków drobnoustrojów, takich jak: tężec, wąglik, botulizm itp. .

Analiza gleby: informacje ogólne

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. Metody mikrobiologicznych badań gleby powinny przede wszystkim obejmować bezpośrednią mikroskopię i wysiewanie na gęstym pożywce. Populacje drobnoustrojów i ich grupy zamieszkujące glebę różnią się w swojej pozycji taksonomicznej i funkcji ekologicznych. W nauce łączy się je pod ogólnym określeniem "biota glebowa". Ziemia jest siedliskiem ogromnej liczby mikroorganizmów. W glebie znajduje się od 1 do 10 miliardów komórek. W tym środowisku następuje rozkład substancji organicznych z udziałem różnych mikroorganizmów saprofitycznych.

Mikroskopowa metoda badań mikrobiologicznych: etapy

Analiza środowiska zaczyna się od próbkowania. W tym celu użyj wcześniej czyszczonego i przetarlonego noża alkoholowego (można użyć łopaty). Następnie przygotowuje się próbkę. Następnym krokiem jest zliczanie komórek na plamach barwionych. Rozważmy każdy etap oddzielnie.

Pobieranie próbek

Analizując glebę uprawną, z reguły pobierane są próbki z głębokości całej warstwy. Najpierw usuń 2-3 cm od wierzchołka gleby, ponieważ może zawierać zagraniczną mikroflorę. Po tym, monolity są pobierane z badanego terenu gleby. Długość każdego z nich powinna odpowiadać grubości warstwy, z której trzeba pobrać próbkę.

Na działce o powierzchni 100-200 metrów kwadratowych. M, pobiera się 7-10 próbek. Waga każdego z nich wynosi około 0,5 kg. Próbki muszą być dokładnie wymieszane w woreczku. Po tym czasie weź średnią próbkę ważącą około 1 kg. Powinien być umieszczony w pergaminie (jałowej) torbie, osadzonej w torebce. Przed bezpośrednią analizą, próbka jest przechowywana w lodówce.

Przygotowanie do badań

Mieszana ziemia jest nalewana na suche szkło. Wstępnie należy go wytrzeć alkoholem i palić nad palnikiem. Używając łopatki, gleba jest dokładnie wymieszana i równomierna. W przeciwnym razie konieczne jest usunięcie korzeni, innych zewnętrznych elementów. W tym celu stosuje się pinceta. Przed rozpoczęciem pracy pieczenie i szpatułka są kalcynowane nad palnikiem i chłodzone.

Z małych części gleby rozprowadzonej na szkle pobierane są małe porcje. Są one ważone w misce porcelanowej w skali technicznej. является специальная обработка образца. Obowiązkowym etapem mikroskopowej metody badania mikrobiologicznego jest specjalne przetwarzanie próbki. Konieczne jest wcześniejsze przygotowanie 2 sterylnych kolb. Ich pojemność nie powinna przekraczać 250 ml. W jednej z butelek wlewa się 100 ml wody wodociągowej. Z tego zabiera 0,4-0,8 ml płynu i zwilża zawieszenie gleby w stanie pasty. Mieszaninę należy pocierać palcem lub tłuczkiem gumowym przez 5 minut.

Z wodą z pierwszej kolby masa gleby przenosi się do pustej kolby. Potem zostaje potarte. Następnie masa jest przenoszona do kolby w pobliżu płomienia palnika. Pojemnik z zawiesiną gleby wstrząsany jest na kołowrotku przez 5 minut. Potem pozostanie na około 30 sekund. Jest to konieczne, aby duże cząsteczki osiadły. Po pół minuty masa służy do przygotowania preparatu.

Liczenie komórek na stałych zabrudzeniach

, разработанному Виноградским. Bezpośrednie badanie mikroskopowe gleby przeprowadza się zgodnie z metodą badań mikrobiologicznych opracowaną przez Winogradsky'ego. W pewnej objętości przygotowanej zawiesiny liczona jest liczba komórek mikroorganizmów. Badanie stałych zabrudzeń pozwala zaoszczędzić leki przez długi czas i wykonywać obliczenia w dowolnym dogodnym czasie.

Przygotowanie leku jest następujące. Stosuje się pewną objętość zawiesiny (zazwyczaj 0,02-0,05 ml) przy użyciu mikropipety na slajdzie. Dodaje się kroplę roztworu agar-agar (mieszaniny polisacharydów agaropektyny i agarozy ekstrahowanej z brązowego i czerwonego wodorostu Morza Czarnego), mieszają się szybko i rozprowadzają na powierzchni 4-6 metrów kwadratowych. Zobacz Smar jest suszony na powietrzu i zamocowany na 20-30 minut. Alkohol (96%). Następnie preparat zwilża się wodą destylowaną, umieszcza się w roztworze erytrocytów karbolowej przez 20-30 minut.

Po barwieniu przemywa się i suszy w powietrzu. Komórki są liczone z celem zanurzeniowym.

Siew na gęstych nośnikach

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Mikroskopowe metody badań mikrobiologicznych umożliwiają identyfikację dużej liczby mikroorganizmów. Ale mimo to metoda siewu jest uważana za najczęściej spotykaną w praktyce. Jego istotą jest zasiewanie objętości preparatu (zawieszenie glebowe) na płycie Petriego na gęstym podłożu.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Ta metoda badań mikrobiologicznych pozwala nam uwzględnić nie tylko ilość, ale również skład grupy, aw niektórych przypadkach skład gatunkowy mikroskopowej flory. Liczbę kolonii jest zazwyczaj wykonywany z dna naczynia Petriego w świetle przechodzącym. W wyliczonej sekcji kropka jest umieszczana za pomocą znacznika lub tuszu.

Analiza wody

Mikroflora ciała wodnego, co do zasady, odzwierciedla mikrobiologiczną kompozycję gleby w jej pobliżu. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. W związku z tym metody badań sanitarnych i mikrobiologicznych dotyczących wody i gleby mają szczególne znaczenie w badaniu stanu danego ekosystemu. Świeże stawy zawierają, co do zasady, kokcy, bakterie w kształcie pręta.

Anerobowe w wodzie występują w małych ilościach. Co do zasady, rozmnażają się na dnie zbiorników, w mule, uczestnicząc w procesach oczyszczania. Mikroflora oceanów i mórz reprezentowana jest głównie przez bakterie słodownicze (halofilne).

W mikroorganizmach praktycznie nie ma studni artezyjskich. Jest to spowodowane zdolnością filtrowania warstwy gruntu.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. Ogólnie przyjętymi metodami badania mikrobiologicznego wody są oznaczanie liczby bakterii i zapalenie okrężnicy lub wskaźnika koliformu. Pierwszy wskaźnik charakteryzuje liczbę bakterii w 1 ml płynu. Indeks coli jest liczbą E. coli obecną w litrze wody, a mianem kolitacji jest minimalna ilość lub maksymalne rozcieńczenie cieczy, w której mogą nadal być wykryte.

Określenie liczby bakterii

Ta metoda sanitarnych badań mikrobiologicznych wód jest następująca. W 1 ml wody określa się ilość beztlenowców fakultatywnych i mezofilnych (pośrednich) aerobów, które są zdolne do agarowania mięsa (głównego środka odżywczego) w temperaturze 37 ° C. W ciągu dnia tworzą się kolonie, widoczne ze wzrostem 2-5 r. Lub z gołym okiem.

является посев. Kluczowym etapem tej metody badań mikrobiologicznych jest siew. Z każdej próbki wysiewa się co najmniej 2 różne objętości. Analizując wodę wodociągową do każdej filiżanki dodaje się 1-0,1 ml czystej cieczy i 0,01-0,001 ml zanieczyszczonej cieczy. Do siewu 0,1 ml lub mniej, ciecz jest rozcieńczana wodą destylowaną (sterylną). Konsekwentnie przygotuj dziesięciokrotne rozcieńczenia. 1 ml każdego z nich dodaje się do dwóch płytek Petriego.

Rozcieńczenia napełniono agarem odżywczym. Musi być wstępnie stopiony i schłodzony do 45 stopni. Po aktywnym mieszaniu podłoże pozostawia się na poziomej powierzchni w celu zestalenia. W 37 stopni. Rośliny uprawiane są przez cały dzień. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. Metodą badań w zakresie badań mikrobiologicznych wód jest możliwość uwzględnienia wyników na tych płytach, w których liczba kolonii mieści się w zakresie od 30 do 300.

Powietrze

Jest uważany za medium tranzytowe dla mikroorganizmów. являются седиментация (оседание) и аспирация. Głównymi metodami badania mikrobiologicznego są osiadanie (sedymentacja) i aspiracja.

Mikroflora środowiska powietrznego jest warunkowo podzielona na zmienną i stałą. Pierwsze to: drożdże, kokcy tworzące pigmenty, pręciki bakteryjne, pręty i inne mikroorganizmy, odporne na suszenie, lekkie narażenie. Przedstawiciele zmiennej mikroflory, przenikną do powietrza z ich zwykłego siedliska, nie trwają długo ich żywotność.

W powietrzu dużych mikroorganizmów są znacznie więcej niż w powietrzu na obszarach wiejskich. Nad morzem lasy bakterii są bardzo niewielu. Usuwanie powietrza ułatwia opadanie: śnieg i deszcz. W zamkniętych pomieszczeniach drobnoustrojów znacznie więcej niż w otwartych przestrzeniach. Ich liczba wzrasta w okresie zimowym przy braku regularnego wywietrzania.

Sedymentacja

считается простейшим. Ta metoda badań mikrobiologicznych w mikrobiologii jest uważana za najprostszą. Opiera się on na osadzaniu kropel i cząstek na powierzchni agaru w otwartej płycie Petriego pod działaniem ciężkości. Metoda sedymentacji nie określa dokładnie liczby bakterii w powietrzu. Faktem jest, że raczej trudno jest złapać małe fragmenty cząstek pyłu i bakterii na otwartym kubku. Głównie duże cząstki są zatrzymywane na powierzchni.

Metoda ta nie jest wykorzystywana do analizy powietrza atmosferycznego. To środowisko odznacza się dużymi wahaniami prędkości przepływu powietrza. Sedymentacja może być stosowana w przypadku braku bardziej wyrafinowanych instrumentów lub źródła energii elektrycznej.

Określenie liczby bakterii przeprowadza się metodą Omelyansky. Zgodnie z tym, przez 5 minut na powierzchni agaru o powierzchni 100 metrów kwadratowych. Cm ustala liczbę bakterii występujących w 10 litrach powietrza.

Postanowienie 535 "W sprawie zjednoczenia mikrobiologicznych metod badawczych"

Analiza bakteriologiczna zajmuje ważne miejsce w kompleksie klinicznych i laboratoryjnych działań mających na celu diagnozowanie, zapobieganie i leczenie różnych chorób zakaźnych. Są to jednak nie tylko badania środowiska.

Szczególnie ważne jest analiza bakteriologiczna materiału biologicznego w instytucjach medycznych. W badaniach wydanych w placówkach medycznych powstały podwyższone wymagania. Celem rozporządzenia o ujednoliceniu metod badań mikrobiologicznych jest usprawnienie analizy bakteriologicznej, poprawa jakości i skuteczności diagnozy mikrobiologicznej.

Mikroskopowe badanie rozmazów u kobiet

Jest to kluczowa metoda analizy w diagnozowaniu zakażeń przenoszonych drogą płciową i chorobach oportunistycznych (spowodowanych bakteriami oportunistycznymi).

Analiza mikroskopowa pozwala ocenić jakościowy i ilościowy skład mikroflory, zweryfikować poprawność próbkowania. Na przykład obecność nabłonka pochwy w próbce pobranej z kanału szyjnego wskazuje na naruszenie biologicznych reguł pobierania próbek.

Warto zaznaczyć, że badanie mikrobiologiczne w tym przypadku jest zwykle związane z pewnymi problemami. Są związane z faktem, że w dolnych częściach układu rozrodczego występuje zwykle różnorodna mikroflora, która zmienia się w różnych okresach wiekowych. Aby poprawić skuteczność badania opracowano ujednolicone zasady.

Diagnoza zakażeń wirusowych

Jest przeprowadzany za pomocą metod wykrywania patogenów RNA i DNA. Są one oparte głównie na określeniu sekwencji nukleotydowych w materiale patologicznym. W tym celu stosuje się sondy molekularne. Są to sztucznie wytwarzane kwasy nukleinowe komplementarne do kwasów wirusowych oznaczonych etykietą radioaktywną lub biotyną.

Specyficzną cechą metody jest wielokrotne kopiowanie konkretnego fragmentu DNA, zawierającego kilkaset (lub dziesięć) par nukleotydowych. Mechanizm replikacji (kopiowanie) polega na tym, że ukończenie może rozpocząć się tylko w pewnych blokach. W celu ich utworzenia, stosuje się startery (startery). Są syntetyzowanymi oligonukleotydami.

Diagnostyka PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) są łatwe do wykonania. Ta metoda pozwala szybko uzyskać wynik przy użyciu niewielkiej ilości materiału patologicznego. Za pomocą diagnostyki PCR wykryto ostre, przewlekłe i ukryte (ukryte) infekcje.

Z wrażliwością uważa się, że ta metoda jest korzystna. Jednak obecnie systemy testowe nie są wystarczająco wiarygodne, więc diagnostyka PCR nie może całkowicie zastąpić tradycyjnych metod.